傳代培養法

傳代培養法

原理

細胞在培養瓶長(cháng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長(cháng)，同時(shí)也將細胞數量擴大，就必須進(jìn)行傳代（再培養）。 傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養細胞進(jìn)行各種實(shí)驗的必經(jīng)過(guò)程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

材料和試劑

1.細胞：貼壁細胞株

2.試劑：0.25％胰酶、1640培養基（含10％小牛血清）

3.儀器和器材：倒置顯微鏡，培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等

操作步驟

1.吸除培養瓶?jì)扰f培養液。

2.向瓶?jì)燃尤胍鹊鞍酌负虴DTA混合液少許，以能覆滿(mǎn)瓶底為限。

3.置溫箱中2~5分鐘，當發(fā)現細胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大后，立即終止消化。

4.吸除消化液，向瓶?jì)茸⑷際anks液數毫升，輕輕轉動(dòng)培養瓶，把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時(shí)，動(dòng)作要輕，以免把已松動(dòng)的細胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液?jiǎn)为毾?，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養液。

5.用吸管吸取營(yíng)養液輕輕反復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。

6.計數板計數后，把細胞懸液分成等份分裝入數個(gè)培養瓶中，置溫箱中培養。

原理

細胞在培養瓶長(cháng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細胞能繼續生長(cháng)，同時(shí)也將細胞數量擴大，就必須進(jìn)行傳代（再培養）。 傳代培養也是一種將細胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養細胞進(jìn)行各種實(shí)驗的必經(jīng)過(guò)程。懸浮型細胞直接分瓶就可以，而貼壁細胞需經(jīng)消化后才能分瓶。

材料和試劑

1.細胞：貼壁細胞株

2.試劑：0.25％胰酶、1640培養基（含10％小牛血清）

3.儀器和器材：倒置顯微鏡，培養箱、培養瓶、吸管、廢液缸等

操作步驟

1.吸除培養瓶?jì)扰f培養液。

2.向瓶?jì)燃尤胍鹊鞍酌负虴DTA混合液少許，以能覆滿(mǎn)瓶底為限。

3.置溫箱中2~5分鐘，當發(fā)現細胞質(zhì)回縮，細胞間隙增大后，立即終止消化。

4.吸除消化液，向瓶?jì)茸⑷際anks液數毫升，輕輕轉動(dòng)培養瓶，把殘余消化液沖掉。注意加Hanks液沖洗細胞時(shí)，動(dòng)作要輕，以免把已松動(dòng)的細胞沖掉流失，如用胰蛋白酶液?jiǎn)为毾?，吸除胰蛋白酶液后，可不用Hanks液沖洗，直接加入培養液。

5.用吸管吸取營(yíng)養液輕輕反復吹打瓶壁細胞，使之從瓶壁脫離形成細胞懸液。

6.計數板計數后，把細胞懸液分成等份分裝入數個(gè)培養瓶中，置溫箱中培養。